Il test PCR (Polimerase Chain Reaction) è una tecnologia di base nella diagnostica molecolare. La standardizzazione dei suoi processi di imballaggio e test influisce direttamente sull'accuratezza e sulla biosicurezza dei risultati. Questo articolo fornisce una prospettiva professionale sui punti chiave di controllo della qualità durante il processo di test della PCR.
La ricevuta e il pretrattamento del campione sono i primi passi del processo. I laboratori devono verificare rigorosamente l'identificazione del campione, le condizioni di trasporto e i tempi di stoccaggio per garantire l'integrità del campione. Al ricevimento, i campioni devono essere numerati e registrati in un gabinetto di biosicurezza e sottoporsi a procedure di elaborazione pre - come lisi ed estrazione di acido nucleico in base al tipo di test. Durante questa fase è richiesto un sistema di verifica della persona a due - per evitare la contaminazione incrociata -.
La preparazione del sistema di reazione PCR deve essere eseguita all'interno di una panchina pulita. Gli operatori devono indossare apparecchiature di protezione di livello 3 e utilizzare nucleasi - materiali di consumo gratuiti. La preparazione del reagente aderisce al principio del "flusso di lavoro unidirezionale", spostandosi dall'area di preparazione del reagente all'area di elaborazione del campione e quindi all'area di amplificazione. I controlli negativi, i controlli positivi e i controlli interni devono essere inclusi in ciascun batch di reazione per monitorare la validità sperimentale.
Durante la fase di amplificazione e test, lo strumento PCR deve essere pre -calibrato i parametri calibrati e il ciclo della temperatura verificati. La procedura di reazione in genere include tre passaggi: denaturazione (94 - 95 gradi), ricottura (50-65 gradi) ed estensione (72 gradi). Il numero di cicli viene regolato in base al bersaglio di rilevamento. La PCR di fluorescenza in tempo reale richiede anche il monitoraggio della soglia del segnale di fluorescenza di canali specifici.
L'analisi e il rendiconto dei risultati devono essere eseguiti da tecnici qualificati. I dati grezzi devono essere esaminati da almeno due professionisti per confermare la morfologia della curva di amplificazione, la plausibilità del valore CT e la conformità dei materiali di controllo della qualità con gli standard. Il rapporto finale dovrebbe includere informazioni sulla metodologia del test, la base per l'interpretazione dei risultati e una dichiarazione delle limitazioni del test.
L'intero processo aderisce rigorosamente alle specifiche CDC ISO 15189 e pertinenti. Un sistema a tripla garanzia di monitoraggio ambientale, manutenzione delle attrezzature e formazione del personale è implementato per garantire l'affidabilità e la tracciabilità dei test PCR.